该画作经过美术专家及碳14鉴定法证实是真迹。美国加州大学艺术史教授佩德雷蒂表示，科学测试已证明这幅油画确实是达·芬奇的作品，尤其是女人脸的部分，马上就能认出是达·芬奇的笔风。

　　科学测试显示德埃斯特肖像画中颜料和达·芬奇其他作品的颜料相同，该画的年代介于1460年至1650年之间。佩德雷蒂指出，由于原画素描并没有完成品上的头饰和手上拿的叶子，因此仍须进一步分析这两项是出自达·芬奇之手还是他的学生。